4 / 52
4
предварительные данные о микрофлоре и наметить пути дальнейшего
исследования. Достоверность микроскопического метода значительно
повышается при проведении иммунофлюоресцентного исследования (РИФ).
Материал можно изучать, используя световую, темнопольную и
фазово-контрастную микроскопию.
Для выявления неспоровых анаэробов применяют модифицированный
метод окраски по Граму, с докраской сафранином.
1.Фиксированный мазок окрашивают генциановым фиолетовым 1 мин.
2. Наносят раствор Люголя на 1 мин.
3. Обесцвечивают препарат этиловым спиртом 0,5 – 1 мин.
4. Промывают водой.
5.Окрашивают сафронином 3-5 мин, промывают водой, высушивают и
микроскопируют.
Бактероиды, фузобактерии, вейлонеллы окрашиваются в розовый цвет, а
пептококки, пептострептококки, клостридии сохраняют фиолетовую окраску.
Метод окраски по чувствительности к кислороду анаэробных и
аэробных микроорганизмов.
Этот метод рассчитан на продукцию фермента каталазы, который
расщепляет перекиси.
1.
Нефиксированный мазок окрашивают 0,2% метиленовым синим 20
мин.
2.
Наносят 3% раствор фтористого натрия на 10 мин.
3.
Обрабатывают 3% перекисью водорода 5 мин.
4.
Фиксируют 96% этанолом 10 мин.
5.
Окрашивают 1% фуксином 7 мин.
Каталазоотрицательные бактерии (анаэробы) окрашиваются в голубой
цвет.
Бактериологический
метод основан на выделении чистой культуры
возбудителя и ее последующей идентификации на основании
морфологических, культуральных, биохимических, антигенных и других
признаков. Бактериологический метод имеет определяющее значение в
лабораторной диагностике, является наиболее информативным и
достоверным, особенно если он подтвержден серологическими данными.
Для бактериологического исследования материал должен быть сразу
после забора помещен в транспортную питательную среду с целью
сохранения жизнеспособности микробов.
Успех этого метода зависит от использования подходящих
питательных сред и условий культивирования, так как большая часть рези-
дентов является строгими анаэробами или микроаэрофилами.
Для подсчета колоний жизнеспособных клеток используют метод
серийных разведений в стерильном физиологическом растворе (1 : 10, 1 : 20
и так далее). Из каждого разведения определенный объем засевают на
поверхность плотной среды. После инкубации подсчитывают количество
КОЕ (колониеобразующих единиц) и пересчитывают количество на
исходный объем.