8 / 116
6
чения среза ткани необходимо проведение ряда этапов, главными из
которых являются инкубация среза с антителами и детекция (визуа-
лизация) прикрепленных антител в световом микроскопе с использо-
ванием специальных веществ (хромогенов).
В настоящее время использование гибридомной технологии по-
зволило производить огромное количество моноклональных антител,
которые можно разделить на ряд групп – моноклональные антитела
для выявления цитоспецифических антигенов, моноклональные анти-
тела для выявления антигенов, характеризующих степень дифферен-
цировки клеток, моноклональные антитела для выявления антигенов,
характеризующих темп роста и прогноз опухоли. В качестве приме-
ра можно назвать моноклональные антитела для различных типов
лимфоцитов –
CD
3 (зрелые
Т
-клетки),
CD
4 (
Т
-хелперы-индукторы),
CD
5 (
Т
-клетки),
CD
20 (большинство
В
-клеток),
CD
24 (молодые фор-
мы
В
-клеток),
CD
75 (
В
-клетки при размножении в центре фолликула),
PC
-1 (плазматические клетки).
Молекулярно-цитогенетические методы.
В последние годы раз-
работан принципиально новый метод изучения хромосом – метод
FISH
(fluorescent in situ hybridization)
,
заключающийся в подготовке,
так называемого, ДНК-зонда, представляющего
однонитевой участок
ДНК, к которому присоединяется биотин.
На микроскопическом препарате
in situ
при обработке щелочью
хромосомная ДНК денатурируется (разрываются связи между двумя
нитями ДНК). Зондом обрабатывают препарат. Поскольку последова-
тельность оснований ДНК-зонда и соответствующий участок хромо-
сомы взаимно комплементарны, зонд присоединяется именно к этой
хромосоме или к конкретному участку хромосомы. В этом участке
происходит ренатурация (восстановление) ДНК. Это явление носит
название «гибридизация». После этого препарат обрабатывают ве-
ществом, которое способно избирательно присоединиться к биотину.
К этому веществу присоединен флюоресцентный краситель (рода-
мин, имеющий красный цвет или флюоресцеин изотиоцианат зеле-
ного цвета). С помощью люминесцентного микроскопа окрашенные
хромосомы можно увидеть на фоне неокрашенных.
В настоящее время предложено использовать комбинацию мето-
дов иммунофенотипирования и
FISH
-метода. Для этого анализа ис-