000214

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

Определение количества иммуноглобулинов в сыворотке крови мето-

дом радиальной иммунодиффузии (по Манчини)

Принцип метода основан на том, что в агаровом геле, содержащем специ-

фическую антисыворотку, при внесении в нее исследуемой сыворотки, со-

держащей иммуноглобулины, образуются кольца преципитации. Диаметр и

площадь колец преципитации находятся в прямой зависимости от концен-

трации исследуемого иммуноглобулина в сыворотке крови.

За 2–3 дня до практического занятия готовят пластинки агарового геля

с соответствующими антисыворотками. После застывания агарового геля

в пластинках вырезают лунки диаметром 3–4 мм. В лунки вносят по капле

исследуемой сыворотки и оставляют на 18–24 часа. За это время иммуно-

глобулины диффундируют в агаровый гель, образуют со специфическими

белками антисыворотки кольца преципитации.

На занятии проводят измерение диаметров колец преципитации иссле

дуемых сывороток. Циркулем измеряют диаметр каждого кольца преципи-

тации в двух противоположных направлениях и вычисляют среднее значе-

ние. Количество иммуноглобулинов вычисляют по калибровочной кривой,

выражающей зависимость между уровнем иммуноглобулинов и диаметром

колец преципитации. На оси абсцисс калибровочной кривой откладывают

диаметр кольца преципитации, восстанавливают перпендикуляр до пересе-

чения с калибровочной кривой. Точку пересечения проецируют на ось ор-

динат, полученное значение соответствует количеству иммуноглобулинов

(в мг/мл). Полученные результаты (кольца преципитации) зарисовывают, ко-

личество иммуноглобулинов записывают в протокол исследования.

Обсуждение результатов исследования ведут, ответив на следующие вопросы:

1. Каков механизм образования колец преципитации в агаровом геле при

добавлении антигена?

2. Какие количественные изменения иммуноглобулинов выявлены при

исследовании пластинок с агаровым гелем?

3. Определить вид, возможные механизмы гуморального иммунодефици-

та в проведенных исследованиях.

4. Какие клинические проявления иммунодефицита можно предполо-

жить по полученным результатам исследования?

ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ

Выберите один или несколько правильных ответов.

1. К гуморальным иммунодефицитам относятся

1) синдром Ди Джорджи

2) ретикулярная дисгенезия

3) агаммаглобулинемия Брутона

4) синдром незавершенного фагоцитоза

5) дефицит

Ig А