000260

14 Осветитель КМ устроен таким образом, что фокусирует свет в от- дельной анализируемой точке. Обычно в качестве осветителя исполь- зуется лазер с определённой длиной волны. Поэтому размеры анали- зируемой точки минимальны и строго постоянны. Можно подобрать длину волны лазера, соответствующую максиму- му поглощения флуорохрома (флуоресцентного красителя). Тогда при анализе изображения система «обратит внимание» только на исследуемый объект. Повысятся разрешающая способность и специфичность. В каждый момент времени фотоприёмник регистрирует изображе- ние одной точки объекта. Полноценное изображение строится путём сканирования (при перемещении образца или перенастройке оптиче- ской системы). Данные сканирования поступают в компьютер и обра- батываются, формируя на мониторе изображение объекта. Большинство современных КМ построено на базе люминесцентно- го микроскопа. Следовательно, объекты исследований должны быть предварительно окрашены соответствующим красителем (флуорохромом) или обладать собственной люминесценцией. Каковы возможности конфокальной микроскопии? Благодаря вы- сокому разрешению и контрасту, обычной задачей этого метода яв- ляется изучение клеточных структур – например, цитоскелета, мито- хондрий, ядра, хромосом (даже локализации в них отдельных генов). Причём возможно изучение живых клеток в процессе их жизнедея- тельности. Исследуют также взаимное расположение в клетке двух и более ве- ществ – например, белков. Предварительно белки метятся антителами с разными флуорохромами. В обычный микроскоп трудно разобрать, находятся ли они рядом или один под другим. Конфокальная микроскопия позволяет это сделать. Записав в памяти компьютера серию оптических срезов, можно провести объёмную реконструкцию объекта и получить его трёхмер- ное изображение. Реконструкцию наиболее эффективно применять для объектов, имеющих чёткие контуры, чтобы оценить их форму во всех проекциях. Ещё одна задача – изучение динамических процессов, происходя- щих в живых клетках (например, движения ионов кальция через кле- точные мембраны).