000270

Целью фиксации биологического материала является сохране-

ние прижизненной структуры клеток и тканей путем быстрого воз-

действия на них химических агентов, предотвращающих развитие

посмертных изменений. Универсальным фиксатором является фор-

мальдегид, применяемый в виде 10% раствора формалина. Чтобы

фиксация была равномерной и полной, кусочки ткани должны быть

небольшими, а объем фиксирующей жидкости – во много раз пре-

восходить объем фиксируемого материала. По окончании фиксации

кусочки промывают в воде. Твердые компоненты тканей (например,

отложения солей кальция) удаляют с помощью методов декальцинации.

Кусочки фиксированных тканей заливают в уплотняющую среду

– парафин. Для этого ткань обезвоживают в спиртах возрастающей

концентрации, проводят через промежуточный растворитель (ксилол

или толуол для парафина) и пропитывают парафином. Заливка в па-

рафин позволяет получить тонкие срезы толщиной 3 - 5 мкм. Срезы

для микроскопического исследования изготавливают с помощью сан-

ного или роторного микротомов. Приготовленные срезы наклеивают

на предметное стекло и окрашивают для четкого выделения структур

клеток и тканей, которые по-разному воспринимают красители.

Основными красителями, применяющимися в течение более 100

лет, является гематоксилин и эозин. При этом ядра окрашиваются ге-

матоксилином в синий цвет, а цитоплазма клеток эозином в розовый.

Приготовление гистологического препарата завершается заключени-

ем его в среды, обеспечивающие сохранность структур объекта, его

окраски и прозрачности. Наиболее часто для этих целей применяют

органические смолы, например канадский бальзам.

Морфометрические методы.

При изучении гистологических пре-

паратов важным является не только качественная оценка патологиче-

ских процессов, но и их количественная характеристика. Морфоме-

трия по сути дела является инструментом доказательной медицины.

При этом можно получить информацию об объемных показателях

ядер, клеток, тканей и т.д. Морфометрическими инструментами мо-

гут быть как самые простые (морфометрическая сетка Вейбеля, встав-

ляемая в окуляр микроскопа), так сложные аппараты с программным

обеспечением (Морфология 5).