000270

Приготовление ткани для иммуногистохимического исследования,

как правило, не отличается от рутинных методов. Однако после полу-

чения среза ткани необходимо проведение ряда этапов, главными из

которых являются инкубация среза с антителами и детекция (визуа-

лизация) прикрепленных антител в световом микроскопе с использо-

ванием специальных веществ (хромогенов).

В настоящее время использование гибридомной технологии по-

зволило производить огромное количество моноклональных антител,

которые можно разделить на ряд групп – моноклональные антитела

для выявления цитоспецифических антигенов, моноклональные анти-

тела для выявления антигенов, характеризующих степень дифферен-

цировки клеток, моноклональные антитела для выявления антигенов,

характеризующих темп роста и прогноз опухоли. В качестве примера

можно назвать моноклональные антитела для различных типов лим-

фоцитов - CD3 (зрелые Т-клетки), CD4 (Т-хелперы-индукторы), CD5

(Т-клетки), CD20 (большинство В-клеток), CD24 (молодые формы

В-клеток), CD75 (В-клетки при размножении в центре фолликула),

PC-1 (плазматические клетки).

Молекулярно-цитогенетические методы.

В последние годы раз-

работан принципиально новый метод изучения хромосом – метод

FISH

(fluorescent in situ hybridization)

заключающийся в подготовке,

так называемого, ДНК-зонда, представляющего

однонитевой участок

ДНК, к которому присоединяется биотин.

На микроскопическом препарате

in situ

при обработке щелочью

хромосомная ДНК денатурируется (разрываются связи между двумя

нитями ДНК). Зондом обрабатывают препарат. Поскольку последова-

тельность оснований ДНК-зонда и соответствующий участок хромо-

сомы взаимно комплементарны, зонд присоединяется именно к этой

хромосоме или к конкретному участку хромосомы. В этом участке

происходит ренатурация (восстановление) ДНК. Это явление носит

название «гибридизация». После этого препарат обрабатывают веще-

ством, которое способно избирательно присоединиться к биотину. К

этому веществу присоединен флюоресцентный краситель (родамин,

имеющий красный цвет или флюоресцеин изотиоцианат зеленого

цвета). С помощью люминесцентного микроскопа окрашенные хро-

мосомы можно увидеть на фоне неокрашенных.