000270

В настоящее время предложено использовать комбинацию мето-

дов иммунофенотипирования и FISH-метода. Для этого анализа ис-

пользуют неокрашенные мазки крови, костного мозга или препараты

других тканей. На первом этапе препараты инкубируют со специфи-

ческими моноклональными антителами, затем проводят конъюгацию

с флуорофорами для последующей визуализации комплекса анти-

ген-моноклональное антитело. Далее осуществляют гибридизацию

situ

с ДНК-зондами. Для выявления моноклональных антител и ДНК-

зондов используют флуорофоры, различающиеся по цвету. Изучение

препарата под флуоресцентным микроскопом при наличии необходи-

мого набора фильтров позволяет одновременно проводить анализ им-

мунофенотипа и гибридизационных сигналов в интерфазных ядрах.

Из вышеизложенного можно сделать вывод, что FISH-метод по-

зволяет провести наиболее полный анализ кариотипа (определение

нарушений набора хромосом, диагностика транслокаций, делеций,

дупликаций, инверсий и инсерций). Методика FISH с использовани-

ем локус-специфических ДНК-зондов (LSI) идеально подходит для

детекции конкретных хромосомных аберраций, имеющих диагности-

ческое и прогностическое значение.

Трансмиссионная электронная микроскопия

– метод морфоло-

гического исследования объектов с помощью потока электронов, по-

зволяющих изучить структуру этих объектов на макромолекулярном

и субклеточном уровнях.

Трансмиссионная электронная микроскопия требует специальной

подготовки объектов изучения, однако непременным условием для

любых электронно-микроскопических исследований является фикса-

ция тканей. Для исследования берут биопсийный материал или ма-

териал от трупа вскоре после наступления смерти. Наибольшее рас-

пространение получила фиксация материала в глутаровом альдегиде

с последующей дофиксацией в четырехокиси осмия.

После фиксации необходимо осуществить обезвоживание ткани.

Следующим важным этапом подготовки материала для электронной

микроскопии является заливка (заключение) тканей в заливочные

среды с целью получения блока, позволяющим приготовить тонкий

срез ткани (толщиной не менее 100 нм), через который может пройти