000335

На микроскопическом препарате

in situ

при обработке щелочью хро-

мосомная ДНК денатурируется (разрываются связи между двумя нитями

ДНК). Зондом обрабатывают препарат. Поскольку последовательность

оснований ДНК-зонда и соответствующий участок хромосомы взаим-

но комплементарны, зонд присоединяется именно к этой хромосоме или

к конкретному участку хромосомы. В этом участке происходит ренату-

рация (восстановление) ДНК. Это явление носит название «гибридиза-

ция». После этого препарат обрабатывают веществом, которое способно

избирательно присоединиться к биотину. К этому веществу присоединен

флюоресцентный краситель (родамин – красный цвет или флюоресцеина

изотиоцианат – зеленый цвет). С помощью люминесцентного микроско-

па окрашенные хромосомы можно увидеть на фоне неокрашенных

В настоящее время предложено использовать

комбинацию мето-

дов иммунофенотипирования и

FISH

Для этого анализа использу-

ют неокрашенные мазки крови, костного мозга или препараты дру-

гих тканей. На первом этапе препараты инкубируют со специфиче-

скими моноклональными антителами, затем проводят конъюгацию

с флуорофорами для последующей визуализации комплекса антиген-

моноклональное антитело. Далее осуществляют гибридизацию

in situ

с ДНК-зондами. Для выявления моноклональных антител и ДНК-

зондов используют флуорофоры, различающиеся по цвету. Изучение

препарата под флуоресцентным микроскопом при наличии необходи-

мого набора фильтров позволяет одновременно проводить анализ им-

мунофенотипа и гибридизационных сигналов в интерфазных ядрах.

Из выше изложенного можно сделать вывод, что

FISH

метод позво-

ляет провести наиболее полный анализ кариотипа (определение на-

рушений набора хромосом, диагностика транслокаций, делеций, ду-

пликаций, инверсий и инсерций). Методика

FISH

с использованием

локус-специфических ДНК-зондов (

LSI

) идеально подходит для де-

текции конкретных хромосомных аберраций, имеющих диагностиче-

ское и прогностическое значение.

Таким образом, исследуя операционно-биопсийный материал, врач-

патоморфолог становится непосредственным участником клинической

диагностики заболеваний. Биопсия требует от патологоанатома клини-

ческого мышления, а от врача-клинициста – умения правильно оцени-

вать ответы на биопсию, а также знания и понимания пределов воз-

можности этого метода. Такой клинико-анатомический подход являет-

ся одним из основных принципов патологической анатомии.