8 / 98
6
Таблица 1.
Методы фракционирования и очистки белков
Название метода
Принцип метода
Применение
1. Высаливание Осаждение белков из раствора (пу-
тем снятия заряда и гидратной обо-
лочки) при добавлении солей ще-
лочных и щелочноземельных ме-
таллов и сульфата аммония. Раз-
личные белки выпадают при раз-
ной концентрации соли в растворе.
Для фракционирования бел-
ков. Например, для разделе-
ния глобулинов (выпадают
в осадок при 50% насыще-
нии) и альбуминов (при 100%
насыщении).
2. Диализ
Белки не способны проходить че-
рез полупроницаемую мембрану,
легко пропускающую низкомоле-
кулярные вещества.
Для очистки белков от низко-
молекулярных примесей (со-
лей); используется в аппарате
искусственной почки.
3. Хроматография Метод основан на способности ве-
ществ (окрашенных или неокра-
шенных) специфически адсорби-
роваться на адсорбенте, заключен-
ном в колонку
Для разделения белков на
фракции
3.1. адсобционная метод основан на разной сорби-
руемости на твердом адсорбенте
3.2.распредели-
тельная
Распределение веществ между
неподвижной и движущейся фа-
зой органического растворителя.
Разделяемые вещества переме-
щаются с разной скоростью
Хроматография на бумаге
для разделения аминокислот,
пептидов.
3.3. ионообменная Связывание ионизированных групп
белкой молекулы с противополож-
но заряженными группами ионооб-
менных нерастворимых полимеров.
Для фракционирования бел-
ков.
3.4. аффинная
(по сродству)
Связывание белка специфичным
лигандом, который присоединен
к нерастворимому полимеру. Ли-
гандами могут быть субстраты,
коферменты, антигены, рецепто-
ры, гормоны и др.
Для выделения индивидуаль-
ных белков.
3.5. гель-
фильтрация
Метод «просеивания» молекул че-
рез гранулы сефадекса, имеющего
поры. Скорость прохождения за-
висит от молекулярной массы бел-
ков: чем меньше масса молекул,
тем легче они проникают внутрь
гранул и дольше там задержива-
ются; чем больше масса молекул,
тем быстрее они выделяются.
Для разделения белков по мо-
лекулярной массе.