17 / 34
15
Работа 4.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ
ОБЩЕГО ХОЛЕСТЕРОЛА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
Холестерол
– спирт стероидной природы, который нахо‑
дится во всех тканях человеческого организма. В крови со‑
держится 7–10% от общего количества холестерола в ор‑
ганизме (составляющего у взрослого человека 140–150 г).
По крови холестерин транспортируется только в составе ли‑
попротеинов. Общий холестерол сыворотки крови представ‑
лен двумя фракциями: свободным холестеролом и эфирнос‑
вязанным (холестерол за счет своей гидроксильной группы
может образовывать эфиры с жирными кислотами). В сыво‑
ротке крови содержание этерифицированного холестерола
составляет 70%, а свободного – 30% от общего.
Принцип метода.
Определение концентрации общего
холестерина основано на проведении сопряженных реакций,
катализируемых холестеролэстеразой, холестеролоксидазой
и пероксидазой:
• при гидролизе эфиров холестерина под действием
холе-
стеролэстеразы
образуется свободный холестерин
• образовавшийся и имеющийся в пробе свободный холе‑
стерин окисляется кислородом воздуха при участии фермен‑
та
холестеролоксидазы
с образованием эквимолярного ко‑
личества перекиси водорода
• под действием
пероксидазы
перекись водорода окис‑
ляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного
продукта. Интенсивность окраски пропорциональна концен‑
трации холестерина в исследуемой сыворотке крови.
Реактивы и материалы
Оборудование
1. Сыворотка крови
1. Штатив с пробирками
2. Рабочий раствор ферментов,
содержащий холестеролэстеразу,
холестеролоксидазу, пероксидазу
2. Пипетки
3. Термостат
3. Стандартный раствор холестерола 4. Фотоэлектроколориметр (ФЭК)