000478

20 / 34

18
3. Стандартный раствор, содержащий
холестерол в концентрации 1,29 ммоль/л
(50 мг/100 мл)
3. Фотоэлектроколориметр
(ФЭК)
4. Рабочий раствор ферментов,
содержащий холестеролэстеразу,
холестеролоксидазу, пероксидазу
Ход работы
1. В три пробирки штатива № 1 наливают по 0,3 мл осаж‑
дающего реагента.
2. В опытную пробирку добавляют 0,15 мл сыворотки кро‑
ви, в контрольную – 0,15 мл дистиллированной воды, в кали‑
бровочную– 0,15 мл стандартного раствора холестерола, пере‑
мешивают, инкубируют 10 минут при температуре 18–25 °C.
3. Опытную пробу центрифугируют 10 минут при
3000 об/мин.
4. В три пробирки штатива № 2 наливают по 2 мл рабо‑
чего раствора ферментов для определения концентрации хо‑
лестерола.
5. В опытную пробирку № 2 переносят 0,2 мл исследу‑
емой жидкости из опытной пробирки № 1. Также проводят
перенос 0,2 мл жидкости в контрольную пробирку № 2 и ка‑
либровочную № 2 соответственно из контрольной № 1 и ка‑
либровочной № 1.
6. Пробы инкубируют 10 минут при температуре
18–25 °C.
7. Измеряют оптическую плотность растворов на фотоэ‑
лектроколориметре при длине волны 490 нм (зеленый свето‑
фильтр) в кювете с длиной оптического пути 1,0 см. Фотоме‑
трируют против контрольной пробы.
Расчет концентрации холестерола в составе α–липопроте‑
инов сыворотки крови:
α-ЛП (ммоль/л) = ОПоп /ОПкалиб × 1,29
или α-ЛП (мг/100 мл) = ОПоп/ОПкалиб × 50
где ОП оп – оптическая плотность опытной пробы; ОПкалиб– опти-
ческая плотность калибровочной пробы; 1,29 ммоль/л (50 мг
/100 мл) – концентрация холестерина в калибраторе