6 / 52
4
2. Решите ситуационную задачу:
В иммунологическую лабораторию медицинского учреждения об-
ратился мужчина с целью установить, является ли он отцом ребенка.
У отца, матери, ребенка была взята венозная кровь для иммунофено-
типирования лимфоцитов по системе
HLA
с помощью микролимфо-
цитотоксического теста.
Принцип и проведение микролимфоцитотоксического теста:
Перед исследованием:
• получают суспензию лимфоцитов путем центрифугирования
в градиенте плотности и 2–3‑кратной отмывкой супернатанта в физио-
логическом растворе;
• размораживают микропланшет, содержащий в каждой лунке
по 1 мкл антилейкоцитарных гистотипирующих поликлональных сы-
вороток (анти-
HLA
-
A
, анти-
HLA
-
B
, анти-
HLA
-
C
) в соответствии с про-
токолом исследования.
1. В каждую лунку добавляют 1 мкл суспензии лимфоцитов
(2000–3000 клеток/мкл).
2. Инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин. для
связывания антител с антигенами системы
HLA
на мембране клеток.
3. Добавляют 5 мкл кроличьего комплемента, затем инкубируют
при комнатной температуре 60 мин. Комплемент повреждает мембра-
ны тех лимфоцитов, на поверхности которых образовались иммунные
комплексы.
4. Для того, чтобы различить поврежденные и неповрежденные
лимфоциты, их окрашивают, добавляя 3 мкл 5% эозина с последую-
щей (через 5 мин.) фиксацией 37% формальдегидом (5 мкл).
Учет реакции производят через 30 мин.:
Таблица 1.
Оценка результатов микролимфоцитотоксического теста
% погибших клеток
Результат
0–10 (-)
Отрицательный
11–20 (+)
Сомнительный отрицательный
21–50 (++)
Слабоположительный
51–80 (+++)
Положительный
81–100 (++++)
Сильноположительный
Полученные результаты:
Отец: А2,26 В18,27 С
w
3,4
Мать: А2,11 В18,44 С
w
3,4
F
1
: А2,3 В18,51 С
w
3,4