68

Реактивы и материалы Оборудование 1. Сыворотка крови 1. Штатив с пробирками 2. Биуретовый реактив 2. Пипетки на 1, 10 мл 3. Дистиллированная вода 3. ФЭК, кювета 1 см, красный свето­ фильтр 610 нм 4. Калибровочный график Ход работы 1. В опытную пробирку наливают 1 мл исследуемой сыворотки крови, разведенной в 20 раз и 1мл Н,(). 2. В контрольную пробирку наливают 2 мл Н^О. 3. В обе пробирке добавляют по 8 мл биуретового реактива. Со­ держимое пробирок перемешивают и оставляют на 20 мин при ком­ натной температуре. 4. Определяют оптическую плотность контрольного (Ек) и опыт­ ного (Ео) растворов на фотоэлектроколориметре (ФЭК) с красным светофильтром в кювете с длиной оптического пути 1 см. Находят разность оптических плотностей: Е =Е о - Ек 5. По калибровочной кривой находят количество белка в пробе. Пример расчета Разность оптических плотностей равна 0,14, что соответствует 3,25 мг белка в 1 мл сыворотки крови, разведенной в 20 раз.Следовательно, в 1 л (1000 мл) сыворотки крови 3,25 х 20 х 1000 = 65 г/л. Работа 9. Обнаружение гема в биологической жидкости с по­ мощью бензидиновой реакции Гемоглобин относится к хромопротеинам (гемопротеинам) и на­ ходится в эритроцитах. Имеет четвертичную структуру, состоит из 4 субъединиц. Каждая субъединица состоит из белка глобина и не­ белкового компонента - гема. Для обнаружения крови в биологических жидкостях (желудочный сок, моча) в клинике часто применяют бензидиновую пробу. С помощью этой реакции можно исследовать кровяное пятно на кусочке материи. Для этого материал с кровяным пятном помещают в пробирку, добавляют воду, встряхивают и оставляют на 5 мин. Во­ дная вытяжка используется для проведения бензидиновой пробы.