68

Работа 10. Определение активности пероксидазы крови Пероксидаза (Донор: Н^О^-оксидоредуктаза; КФ 1.11.1.7) относится к классу оксидоредуктаз. Группа гемсодержащих ферментов. Доно­ рами могут служить разнообразные соединения. Пероксидаза ката­ лизирует расщепление перекиси водорода и тем самым препятствует накоплению ее в токсических для организма количествах. RH2 + 2 Н20 2 "вР°ксидаза > R + 2 Н20. Принцип определения активности пероксидазы основан на опреде­ лении времени (в секундах), необходимого для окисления 1 мл 0,001н раствора индигокармина перекисью водорода в результате действия ис­ следуемого фермента. Активность пероксидазы плазмы крови снижается у больных ге­ патитом, циррозом печени, во время наркоза или операции. Реактивы и материалы Оборудование 1. Раствор крови (1:1000); 1 мл раствора содержит 1мкл крови 1. Штатив с пробирками 2. Перекись водорода (0,02 и раствор) 2. Пипетки на 1, 2 и 3 мл 3. Индигокармин (0,001 и раствор) 3. Коническая колба 4. Ацетатный буфер (pH 4,7) 4. Часы с секундной стрелкой Ход работы 1. В колбочку наливают 2 мл ацетатного буфера {pH 4,7) и 3 мл раствора крови. Содержимое колбочки тщательно перемешивают. 2. Добавляют 1 мл 0,001н раствора индигокармина и 2 мл 0,02н раствора перекиси водорода. Смесь перемешивают и отмечают время. Момент прибавления перекиси водорода является началом реакции (синий цвет), в конце реакции синий цвет переходит через промежу­ точный зеленый в желтый цвет. Расчет индекса пероксидазы: г, . Время протекания реакции (в секундах ) Индекс пероксидазы - ------------------------------------------------------- Колличество гемоглобина в крови Индекс пероксидазы в норме составляет 3-8 ед., количество гемо­ глобина в крови 12-16 г%. 31