68

Ход работы 1. Получение саркоплазматических белков: • мышечную ткань (0,5 г) растирают в фарфоровой ступке с по­ рошком из стекла, постепенно добавляя 5 мл 0,03 М раствора хлорида калия до получения гомогенной массы (3-5 мин); • солевую вытяжку фильтруют через тройной слой марли. • фильтрат делят поровну на две части. С первой порцией (0,5 мл) проводят биуретовую реакцию и открывают саркоплазматические бел­ ки, а со второй порцией (0,5 мл) проводят бензидиновую реакцию и от­ крывают миоглобин. • остаток мышечной ткани сохраняют для получения фракций ми- офибриллярных и стромальных белков. 2. Получение миофибриллярных белков: • ткань, оставшуюся после получения саркоплазматических бел­ ков, отмывают от следов саркоплазматических белков путем повторно­ го экстрагирования новыми порциями (по 2 мл) 0,03 М раствора хло­ рида калия. • промывную жидкость отбрасывают, предварительно проделав биуретовую реакцию. • тщательно отмытую ткань (промывная жидкость дает отрица­ тельную биуретовую реакцию) заливают в ступке 5мл 0,6 М рас­ твора хлорида калия, растирают, фильтруют через несколько слоев марли. • миозиновую фракцию осаждают путем разведения 15-кратным объемом дистиллированной воды. • остаток ткани оставляют для получения коллагена. 3. Получение коллагена мышечной ткани. • - для удаления следов миозиновой реакции остаток ткани отмы­ вают новыми порциями (по 2 мл) 0,6 М раствора хлорида калия до по­ лучения отрицательной биуретовой реакции. • промывную жидкость сливают. • остаток ткани с марлевого фильтра переносят в пробирку, зали­ вают 5 мл дистиллированной воды и кипятят на водяной бане 15 мин. • после охлаждения раствор фильтруют через бумажный фильтр. • с фильтратом проделывают биуретовую реакцию. Получается сине-фиолетовое окрашивание, характерное для коллагена. 36