68

Реактивы и материалы Оборудование 1. Кожа 1. Штатив с пробирками 2. Трихлоруксусная кислота (5% раствор) 2. Стеклянная палочка 3. Едкий натр (10% раствор) 3. Ступка с пестиком. Порошок стекла 4. Сульфат меди (1% раствор) 4. Водяная баня (100°С) 5. Центрифуга 6. Ножницы 7. Пипетка на 5 мл Ход работы 1. 0,2 г сырой кожи размельчают ножницами и растирают в ступ­ ке со стеклом до получения кашицеобразной массы. 2. Эту массу из ступки переносят в центрифужную пробирку и добавляют к ней 3,0 мл 5% раствора трихлоруксусной кислоты. 3. Пробу перемешивают и ставят в водяную баню при 100°С на 10 мин. 4. Пробу центрифугируют 5 мин. при 3000 об/мин. 5. К 0,3-1 мл надосадочной жидкости добавляют равный объем раствора едкого натра и 1 каплю раствора сернокислой меди. Появля­ ется фиолетовое окрашивание. Работа 2. Определение гидроксипролина в гидролизате кожи Гидроксипролин образуется в результате окисления остатков про- лина в составе белка коллагена на этапе пострибосомальной модифи­ кации в процессе микросомального окисления: он пропил гидроксил .13л - С О — [о] вит. С —N - с о — Пролин и 4-гидроксипролин составляют около 25% всех амино­ кислотных остатков этого белка соединительной ткани. Метод основан на окислении гидроксипролина хлорамином Б, продукты окисления конденсируют парадиметиламинобензальдеги- дом, при этом образуется хромоген красного цвета. 38