68

Реактивы и материалы Оборудование 1. Плазма крови 1. Штатив с пробирками 2. 16,1 М (94%) этанол, содержащий 0,1 М (9,8 г/л) уксуснокислого калия и 0,17 М (10,1 мл/л ледяной уксусной кислоты) уксусной кислоты 2. Пипетки на 0,1; 1; 2 и 5 мл 3. 0,3 М (5%) трихлоруксусной кислоты 3. Водяная баня (100°С) 4. Концентрированная серная кислота, содержа­ щая 0,2 М (9,5 г/л) тетраборнокислого натрия 4. ФЭК, зеленый светофильтр, кювета 1 см 5. 0,01 М (1,67 г/л) раствор карбазола в 16,1 М (94%) этаноле 5. Центрифуга 6. 16,1 М (94%) этанол 7. Стандартные растворы, содержащие в 1 мл 5, 20 и 50 мкг глюкуроновой кислоты (молекуляр­ ная масса 196Да) Ход работы 1. В центрифужную пробирку наливают 0,5 мл исследуемой био­ логической жидкости (сыворотка или плазма крови, моча, спинно­ мозговая жидкость, слюна, желудочный сок, желчь) и 2 мл охлажден­ ного до 1-5°С этанола, содержащего уксуснокислый калий и уксусную кислоту. 2. Пробу перемешивают и через 5-6 мин центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин. 3. Осадок эмульгируют в 3 мл 0,3 М ТХУ и полученную смесь ги­ дролизуют в кипящей водяной бане в течение 30 мин, пользуясь ка- плеуловителем. 4. Пробу охлаждают до 10-22°С и центрифугируют (3000 об/мин, 10 мин). 5. В надосадке определяют содержание гексуроновых кислот. В 2 пробирки (одна из них - контроль) при охлаждении в воде со льдом и перемешивании приливают по 1 мл полученного надосадка и 5 мл реактива № 4. 6. Пробы нагревают в течение 10 мин в кипящей водяной бане и охлаждают до 10-22°С. 7. В опытную пробу добавляют 0,1 мл реактива № 5, а в контроль­ ную - 0,1 мл этанола. Содержимое пробирок перемешивают, нагрева­ ют в течение 120-130 с в сильнокипящей водяной бане. Развивается фиолетово-розовое окрашивание. 41