68

8. Через 10 мин пробы фотометрируют со светло-зеленым свето­ фильтром (530 нм) в кюветах с толщиной слоя 1см, напротив реактива №3 (в кюветах при внесении исследуемых проб не должно быть капе­ лек поды). Находят разность величин оптических плотностей опыт­ ной и контрольной проб. 9. По калибровочному графику определить концентрацию гексу- роновых кислот. Содержание гликозаминогликанов выражают через гексуроновые кислоты в мкмолях на суточное количество мочи или мкмолях на 1 л другой биологической жидкости. Работа 5. Количественное определение гексозаминов в био­ логических жидкостях Гексозамины (чаще D-глюкозамин и D-галактозамин) являются структурными компонентами гликозаминогликанов и олигосахарид- ных цепей гликопротеинов. Поэтому они используются для синтеза этих сложных соединений и образуются в результате их распада. Реактивы и материалы Оборудование 1. Плазма крови 1. Штатив с пробирками 2. Соляная кислота (2н раствор) 2. Пипетки на 0,1; 1; 2 и 5 мл 3. Na,C03(2 М раствор) 3. Водяная баня (100°С) 4. Ацетилацетона (2% раствор в 1,5 М Na,C03) 4. Центрифуга 5. Реактива Эрлиха (2,5 г парадиметил- аминобензальдегида в смеси с 30 мл концен­ трированной соляной кислоты и 30 мл этанола 96%) 5. ФЭК, зеленый светофильтр, кювета 1 см 6. Этанол (94%) 6. Ампулы 7. Спиртовка Ход работы 1. К 0,5 мл биологической жидкости или 40 мг гомогената ткани добавить 2 мл 2н раствора соляной кислоты, запаять в ампулы и ги­ дролизовать при температуре 100°С в течение 4 ч. 2. По окончании гидролиза пробы центрифугировать 15 мин. при 3000 об/мин. 3. К 0,6 мл надосадка добавить 0,4 мл 2М раствора Na/'O, и 0,5 мл 2% раствора ацетилацетона в 1,5 М NctjC03. 42