68

4. Пробы нагревать 20 минут при температуре 100°С. 5. Пробы охладить и добавить 1мл этанола и 0,5 мл реактива Эрлиха. 6. Через 5 минут измерить оптическую плотность при длине вол­ ны 530 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм. 7. По калибровочному графику определить концентрацию гексо- заминов. Работа 6. Определение гиалуронидазной активности в био­ логических жидкостях Распад ГАГ в тканях в основном осуществляется лизосомальными ферментами - гиалуроноглюкозаминидазой (КФ 3.2.1.35) и гиалуро- ноглюкуронидазой (КФ 3.2.1.36), суммарная активность которых на­ зывается гиалуронидазной активностью (ГА) по методу П.Н. Шарае- ва и др., 1996. Метод основан на инкубации ферментсодержащей биологической жидкости с гиалуроновой кислотой с последующим определением продуктов ее распада. Реактивы и материалы Оборудование 1. Плазма крови 1. Штатив с пробирками 2. Калий гиалуроновокислый (раствор 2 мг/мл). Стабилен в холоде до 10-12 суток 2. Пипетки на ОД; 1; 2 и 5 мл 3. ОД М ацетатный буфер (pH 3,8) 3. Водяная баня (100°С) 4. Этанол (95-96%) 4. Центрифуга 5. Серная кислота (концентрированная, хч) 5. ФЭК, зеленый светофильтр, кювета 1 см 6. Карбазол (раствор в 95-96% этаноле - 1,25 мг/мл) 6. Ампулы 7. Стандартные растворы: 1, 5 и 10 мкг глюку- роновой кислоты (молекулярная масса 196 Да) в 0,5 мл воды 7. Спиртовка ГА сыворотки крови у больных с активной фазой ревматизма в среднем повышается на 33%. Продолжительные или повторные по­ вышения ГА в сыворотке крови при коллагенозах характерны для не­ благоприятного прогноза заболевания. Рост активности ГА наблюда­ ется также при воспалительных процессах, в частности в острую ста­ дию остеомиелита и перитонита, что следует связать с общей реакци- 43