68

ей организма на патологический процесс. При множественном карие­ се зубов ГА в слюне возрастает до 3 раз. Источником ГА слюны, види­ мо, являются микроорганизмы. Содержание ГА в сыворотке крови и смешанной слюне прак­ тически здоровых лиц (18-30 лет) составляет в среднем 217±10,9 и 102±7,6 мкмоль/л/ч, соответственно. Ход работы 1. В две центрифужные пробирки (одна из них - холостая проба) вносят по 0,1 мл реактива 2 (субстрат) и 0,3 мл буферного раствора. В опытную пробу добавляют 0,1 мл охлажденной (2-4°С) исследуе­ мой сыворотки крови (источник ГА). 2. Содержимое пробирок перемешивают и инкубируют в водяном термостате при 37-38°С в течение 30 мин. Затем их опускают в воду со льдом. 3. К холостой пробе добавляют 0,1 мл исследуемой сыворотки крови. Далее в обе пробы вносят по 1мл холодного этанола. Смеси пе­ ремешивают и через 5-6 мин центрифугируют (3000 об/мин). 4. В надосадочной жидкости определяют количество продук­ тов распада гиалуроновой кислоты по уровню глюкуроновой кисло­ ты (компонент молекул ГАГ). К 0,5 мл надосадочной жидкости опыт­ ной и холостой проб при охлаждении в воде со льдом прибавляют по 2,5 мл реактива №4. 5. После осторожного перемешивания и одновременного охлаж­ дения пробы нагревают в течение 10 мин в кипящей водяной бане и снова охлаждают в воде со льдом. 6. В обе смеси прибавляют по 0,1 мл раствора карбазола, затем их перемешивают, погружая пробирки в воду со льдом, и повторно на­ гревают (100°С, 10 мин). Появляется фиолетово-розовое окрашивание. 7. Смеси охлаждают до 18-24°С, фотометрируют при 530 нм (зе­ леный светофильтр). Определяют разность оптических плотностей опытной и холостой проб, по которой, используя калибровочную кри­ вую, находят количество продуктов гидролиза гиалуроновой кисло­ ты в микрограммах глюкуроновой кислоты. ГА выражают в микро­ молях глюкуроновой кислоты на 1 л сыворотки крови за 1 ч инку­ бации (мкмоль/л/ч). При анализе ГА можно использовать биохимиче­ ские анализаторы. 44