68

Принцип метода основан на реакции взаимодействия фосфорной кислоты с молибденовокислым аммонием в азотной кислоте с обра­ зованием лимонно-желтого кристаллического осадка комплексного соединения фосфорномолибденовокислого аммония. Реактивы и материалы Оборудование 1. Порошок казеина 1. Штатив с пробирками 2. Едкий натр (10%раствор) 2. Пипетки на 2 и 5 мл 3. Азотная кислота (концентрированная) 3. Водяная баня (100°С) 4. Реактив молибденовокислого аммония 4. Фильтр 5. Универсальная индикаторная бумага, цветная шкала Ход работы 1. В пробирку помещают 60-100 мг казеина (порошка), приливают 4 мл 10% раствора едкого натра, закрывают пробкой (центрифужной пробиркой) и смесь ставят в кипящую водяную баню на 40 мин. 2. После окончания гидролиза жидкость охлаждают, нейтрализу­ ют добавлением концентрированной азотной кислоты до слабокислой реакции на лакмус (12-15 капель). При этом выпадают в осадок про­ дукты неполного гидролиза белка. 3. Осадок отфильтровывают и с фильтратом проводят молибдено­ вую пробу на фосфорную кислоту. 4. К 1-2 мл полученного фильтрата добавляют равный объем ре­ актива молибденовокислого аммония и нагревают на водяной бане. Образуется желтый осадок фосфорномолибденовокислого аммония. Работа 4. Выделение казеина из молока Казеин является одним из главных по количеству белков молока с изоэлектрической точкой 4,7. Различают альфа-, бета-, гамма- и каппа-казеины. Они образуют стабильную суспензию, состоящую из больших сферических кальций-протеинат-фосфатных мицелл. При подкислении молока до pH 4,7 растворимость казеина снижа­ ется, что используется для выделения этого белка. 48