000112

Учитывая ограниченную проникающую способность световых лу­ чей, необходимо, чтобы изучаемый объект был оптически прозрачным. Для изготовления тонких (толщиной несколько микрометров) срезов различных тканей разработана специальная гистологическая техника. ^ ? Сначала объект фиксируют. Для этого небольшие кусочки тканей по/ мещают в фиксатор (формалин, спирт, раствор солей ртути и др.), это вызывает консервацию структур объекта. В фиксаторе ткани можно хранить длительное время. Для дальнейшей работы фиксатор отмывают водой. После этого объект помещают в спирты возрастающей концентрации (60° -> 70° -> 80° -> 96° -> 100° (абсолютный спирт)) - спирты извлекают из объекта воду. Затем материал переносят в хлороформ. Пропитанные хлороформом ткани помещают в рас­ топленный парафин. Остужая парафин, получают твёрдые парафиновые блоки с заключёнными в них объектами. Теперь ткань можно порезать на тонкие срезы с помощью специального прибора - микротома. Существуют также методы заливки тканей в желатин, пластмассы и эпоксидные смолы. Большинство биологических объектов бесцветны или слабоокра- шены, поэтому для световой микроскопии применяются разнообраз­ ные красители. Например, для окрашивания ядер используют гема­ токсилин. Эозин окрашивает цитоплазму клетки. Часто используется метиленовый синий - он окрашивает и ядро, и цитоплазму. Важным достоинством метиленового синего является то, что в небольших кон­ центрациях (достаточных для окрашивания) он не влияет на жизне­ деятельность клетки. Подобные красители называют витальными и применяют для изучения живых клеток1. Если необходимо, чтобы микропрепарат хранился долго без измене­ ний структуры и особенностей окраски, применяют специальные ме­ тоды обработки. Срезы переносят на предметные стёкла. Затем из среза удаляют парафин (он мешает окраске). Для этого стекло со срезами помеща­ ют в ксилол, а затем в спирт -> воду -> раствор красителя. После этого окрашенные срезы снова обезвоживают в спиртах, помеща­ ют в ксилол, а затем заключают в кедровый бальзам, на который накла­ дывают покровное стекло. После высыхания бальзама препарат может храниться долгие годы. Такие микропрепараты называют постоянными в отличие от временных, которые изготавливают значительно проще2. 1 При работе с препаратами обратите внимание на испльзованные красители. Постарайтесь запомнить характер окраски при их применении. 2 На занятиях вы освоите методику изготовления временных микропрепаратов. 11