000112

со вторым. При прохождении луча сквозь объект происходит фазовый сдвиг, величина которого пропорциональна плотности структур. С помо­ щью этого метода также можно изучать живые клетки, но, в отличие от тёмнопольной микроскопии, изображение получается цветным. Широко применяются методы флуоресцентной микроскопии. Они основаны на способности ряда красителей (флуорохромов) поглощать свет одной длины волны и излучать свет другой (большей) длины волны. Некоторые вещества обладают собственной флуоресценцией. Напри- / ' ^ мер, витамины А, В2, некоторые липиды, хлорофилл и др. при облучении ультрафиолетом дают характерное свечение определённой окраски. Наиболее часто употребляемые флуорохромы - акридин оранжевый, флуоресцин, йоди­ стый пропидий. Флуоресцентный микроскоп отличается от обычного специальным осветителем и системой фильтров, позволяющих получить изображе­ ние светящейся структуры на тёмном поле. ^ * Развитие электронной техники позволило оснастить микроскопы / \ цифровыми фото- и видеокамерами и передавать изображение в ком­ пьютер. Разработано множество программ для анализа изображений биологи­ ческих структур. Они позволяют определить количество, линейные размеры объектов, степень их окрашивания - это избавляет исследователя от дол­ гой рутинной работы. Микроскопы, объединённые с компьютерными систе­ мами и программами анализа изображений, получили название цифровых. 2.2. КОНФОКАЛЬНАЯ МИКРОСКОПИЯ Один из самых современных и перспективных методов изучения клетки. Конфокальный микроскоп (КМ) принципиально сходен со све­ товым1. Теоретически его разрешающая способность всего в 1,4 раза выше таковой для светового микроскопа, однако в конструкции КМ использован ряд принципиальных усовершенствований. КМ - прибор оптико-электронный. Это сложная система, в состав которой входит компьютер со специальным программным обеспече­ нием, осветитель особой конструкции и фотоприёмник. Следователь­ но, его разрешающая способность и другие свойства зависят не только от оптических узлов, но и от электронных систем преобразования опти­ ческого сигнала в аналоговый электрический, а затем и в цифровой. 1 Принцип конфокальной микроскопии был разработан в 1977 г., а в 1979 г. созданы первые установки. 13