000112

Осветитель КМ устроен таким образом, что фокусирует свет в от­ дельной анализируемой точке. Обычно в качестве осветителя исполь­ зуется лазер с определённой длиной волны. Поэтому размеры анали­ зируемой точки минимальны и строго постоянны. Можно подобрать длину волны лазера, соответствующую максиму- ,■ ^ му поглощения флуорохрома (флуоресцентного красителя). Тогда при анализе изображения система «обратит внимание» только на исследуемый объект. Повысятся разрешающая способность и специфичность. В каждый момент времени фотоприёмник регистрирует изображе­ ние одной точки объекта. Полноценное изображение строится путем сканирования (при перемещении образца или перенастройке оптиче­ ской системы). Данные сканирования поступают в компьютер и обра­ батываются, формируя на мониторе изображение объекта. Большинство современных КМ построено на базе люминесцентно- I ' го микроскопа. Следовательно, объекты исследований должны быть предварительно окрашены соответствующим красителем (флуорохромом) или обладать собственной люминесценцией. Каковы возможности конфокальной микроскопии? Благодаря вы­ сокому разрешению и контрасту, обычной задачей этого метода яв­ ляется изучение клеточных структур - например, цитоскелета, мито­ хондрий, ядра, хромосом (даже локализации в них отдельных генов). Причём возможно изучение живых клеток в процессе их жизнедея­ тельности. Исследуют также взаимное расположение в клетке двух и более ве- r ^ ществ - например, белков. Предварительно белки метятся антителами ли они рядом или один под другим. Конфокальная микроскопия позволяет это сделать. Записав в памяти компьютера серию оптических срезов, можно провести объёмную реконструкцию объекта и получить его трёхмер­ ное изображение. Реконструкцию наиболее эффективно применять для объектов, имеющих чёткие контуры, чтобы оценить их форму во всех проекциях. Ещё одна задача - изучение динамических процессов, происходя­ щих в живых клетках (например, движения ионов кальция через кле­ точные мембраны). с разными флуорохромами. В обычный микроскоп трудно разобрать, находятся 14