000112

Долгое время не удавалось поставить культивирование клеток на стро­ го научную основу, т.к. при изготовлении сред использовались биологические материалы - сыворотка крови, экстракт куриных эмбрионов, эмбриональ­ ная сыворотка коровы и др. Состав этих компонентов сложен и не поддаёт­ ся стандартизации. Только в 1965 г. Р. Дж. Хэм предложил бессывороточную среду строго определённого состава. Для получения культуры клеток из организма выделяют исход­ ный материал - клетки, которые дадут начало первичной культуре. Предпочтительнее для этого брать клетки эмбриональных тканей, опухолевые клетки и мутантные клетки с нарушенным контролем клеточного деления. Перенося клетки из первичной культуры на све­ жую культуральную среду, получают вторичные культуры. При ре­ гулярных пересадках можно добиться сохранения культуры клеток в течение многих лет. Отдельные линии клеток способны расти в виде суспензии - в не­ котором объёме культуральной среды1. Большинство же клеток может расти только на твёрдой основе - подложке. Первоначально в каче­ стве подложки использовался сгусток плазмы крови. В современных методиках применяют контейнеры из обработанного особым образом стекла или специального пластика (рис. 5). Рис. 5. Сосуды для культивирования клеток: А - чашка Колле: плоский со­ суд с клетками на дне; Б - вращающийся сосуд с клетками на дне и на стенках; В - проточная система с колонкой, содержащей клетки на специальном носите­ ле (стеклянные шарики); Г - планшет для культивирования, клетки расположены на мембране вкладыша: 1 - вкладыш, 2 - лунка планшета, 3 - питательная среда (из http://www.biotechnolog.ru) . 1 Наиболее известная и распространённая линия эпителиальных клеток человека - HeLa - широко применяется в биологических и медицинских исследованиях. Она способна расти и размножаться в суспензии. 22