115

4 предварительные данные о микрофлоре и наметить пути дальнейшего исследования. Достоверность микроскопического метода значительно повышается при проведении иммунофлюоресцентного исследования (РИФ). Материал можно изучать, используя световую, темнопольную и фазово-контрастную микроскопию. Для выявления неспоровых анаэробов применяют модифицированный метод окраски по Граму, с докраской сафранином. 1.Фиксированный мазок окрашивают генциановым фиолетовым 1 мин. 2. Наносят раствор Люголя на 1 мин. 3. Обесцвечивают препарат этиловым спиртом 0,5 – 1 мин. 4. Промывают водой. 5.Окрашивают сафронином 3-5 мин, промывают водой, высушивают и микроскопируют. Бактероиды, фузобактерии, вейлонеллы окрашиваются в розовый цвет, а пептококки, пептострептококки, клостридии сохраняют фиолетовую окраску. Метод окраски по чувствительности к кислороду анаэробных и аэробных микроорганизмов. Этот метод рассчитан на продукцию фермента каталазы, который расщепляет перекиси. 1. Нефиксированный мазок окрашивают 0,2% метиленовым синим 20 мин. 2. Наносят 3% раствор фтористого натрия на 10 мин. 3. Обрабатывают 3% перекисью водорода 5 мин. 4. Фиксируют 96% этанолом 10 мин. 5. Окрашивают 1% фуксином 7 мин. Каталазоотрицательные бактерии (анаэробы) окрашиваются в голубой цвет. Бактериологический метод основан на выделении чистой культуры возбудителя и ее последующей идентификации на основании морфологических, культуральных, биохимических, антигенных и других признаков. Бактериологический метод имеет определяющее значение в лабораторной диагностике, является наиболее информативным и достоверным, особенно если он подтвержден серологическими данными. Для бактериологического исследования материал должен быть сразу после забора помещен в транспортную питательную среду с целью сохранения жизнеспособности микробов. Успех этого метода зависит от использования подходящих питательных сред и условий культивирования, так как большая часть рези- дентов является строгими анаэробами или микроаэрофилами. Для подсчета колоний жизнеспособных клеток используют метод серийных разведений в стерильном физиологическом растворе (1 : 10, 1 : 20 и так далее). Из каждого разведения определенный объем засевают на поверхность плотной среды. После инкубации подсчитывают количество КОЕ (колониеобразующих единиц) и пересчитывают количество на исходный объем.