000270

4 Целью фиксации биологического материала является сохране- ние прижизненной структуры клеток и тканей путем быстрого воз- действия на них химических агентов, предотвращающих развитие посмертных изменений. Универсальным фиксатором является фор- мальдегид, применяемый в виде 10% раствора формалина. Чтобы фиксация была равномерной и полной, кусочки ткани должны быть небольшими, а объем фиксирующей жидкости – во много раз пре- восходить объем фиксируемого материала. По окончании фиксации кусочки промывают в воде. Твердые компоненты тканей (например, отложения солей кальция) удаляют с помощью методов декальцинации. Кусочки фиксированных тканей заливают в уплотняющую среду – парафин. Для этого ткань обезвоживают в спиртах возрастающей концентрации, проводят через промежуточный растворитель (ксилол или толуол для парафина) и пропитывают парафином. Заливка в па- рафин позволяет получить тонкие срезы толщиной 3 - 5 мкм. Срезы для микроскопического исследования изготавливают с помощью сан- ного или роторного микротомов. Приготовленные срезы наклеивают на предметное стекло и окрашивают для четкого выделения структур клеток и тканей, которые по-разному воспринимают красители. Основными красителями, применяющимися в течение более 100 лет, является гематоксилин и эозин. При этом ядра окрашиваются ге- матоксилином в синий цвет, а цитоплазма клеток эозином в розовый. Приготовление гистологического препарата завершается заключени- ем его в среды, обеспечивающие сохранность структур объекта, его окраски и прозрачности. Наиболее часто для этих целей применяют органические смолы, например канадский бальзам. Морфометрические методы. При изучении гистологических пре- паратов важным является не только качественная оценка патологиче- ских процессов, но и их количественная характеристика. Морфоме- трия по сути дела является инструментом доказательной медицины. При этом можно получить информацию об объемных показателях ядер, клеток, тканей и т.д. Морфометрическими инструментами мо- гут быть как самые простые (морфометрическая сетка Вейбеля, встав- ляемая в окуляр микроскопа), так сложные аппараты с программным обеспечением (Морфология 5).