000270

6 Приготовление ткани для иммуногистохимического исследования, как правило, не отличается от рутинных методов. Однако после полу- чения среза ткани необходимо проведение ряда этапов, главными из которых являются инкубация среза с антителами и детекция (визуа- лизация) прикрепленных антител в световом микроскопе с использо- ванием специальных веществ (хромогенов). В настоящее время использование гибридомной технологии по- зволило производить огромное количество моноклональных антител, которые можно разделить на ряд групп – моноклональные антитела для выявления цитоспецифических антигенов, моноклональные анти- тела для выявления антигенов, характеризующих степень дифферен- цировки клеток, моноклональные антитела для выявления антигенов, характеризующих темп роста и прогноз опухоли. В качестве примера можно назвать моноклональные антитела для различных типов лим- фоцитов - CD3 (зрелые Т-клетки), CD4 (Т-хелперы-индукторы), CD5 (Т-клетки), CD20 (большинство В-клеток), CD24 (молодые формы В-клеток), CD75 (В-клетки при размножении в центре фолликула), PC-1 (плазматические клетки). Молекулярно-цитогенетические методы. В последние годы раз- работан принципиально новый метод изучения хромосом – метод FISH (fluorescent in situ hybridization) , заключающийся в подготовке, так называемого, ДНК-зонда, представляющего однонитевой участок ДНК, к которому присоединяется биотин. На микроскопическом препарате in situ при обработке щелочью хромосомная ДНК денатурируется (разрываются связи между двумя нитями ДНК). Зондом обрабатывают препарат. Поскольку последова- тельность оснований ДНК-зонда и соответствующий участок хромо- сомы взаимно комплементарны, зонд присоединяется именно к этой хромосоме или к конкретному участку хромосомы. В этом участке происходит ренатурация (восстановление) ДНК. Это явление носит название «гибридизация». После этого препарат обрабатывают веще- ством, которое способно избирательно присоединиться к биотину. К этому веществу присоединен флюоресцентный краситель (родамин, имеющий красный цвет или флюоресцеин изотиоцианат зеленого цвета). С помощью люминесцентного микроскопа окрашенные хро- мосомы можно увидеть на фоне неокрашенных.