000335

37 На микроскопическом препарате  in situ при обработке щелочью хро- мосомная ДНК денатурируется (разрываются связи между двумя нитями ДНК). Зондом обрабатывают препарат. Поскольку последовательность оснований ДНК-зонда и соответствующий участок хромосомы взаим- но комплементарны, зонд присоединяется именно к этой хромосоме или к конкретному участку хромосомы. В этом участке происходит ренату- рация (восстановление) ДНК. Это явление носит название «гибридиза- ция». После этого препарат обрабатывают веществом, которое способно избирательно присоединиться к биотину. К этому веществу присоединен флюоресцентный краситель (родамин – красный цвет или флюоресцеина изотиоцианат – зеленый цвет). С помощью люминесцентного микроско- па окрашенные хромосомы можно увидеть на фоне неокрашенных В настоящее время предложено использовать комбинацию мето- дов иммунофенотипирования и FISH . Для этого анализа использу- ют неокрашенные мазки крови, костного мозга или препараты дру- гих тканей. На первом этапе препараты инкубируют со специфиче- скими моноклональными антителами, затем проводят конъюгацию с флуорофорами для последующей визуализации комплекса антиген- моноклональное антитело. Далее осуществляют гибридизацию  in situ с ДНК-зондами. Для выявления моноклональных антител и ДНК- зондов используют флуорофоры, различающиеся по цвету. Изучение препарата под флуоресцентным микроскопом при наличии необходи- мого набора фильтров позволяет одновременно проводить анализ им- мунофенотипа и гибридизационных сигналов в интерфазных ядрах. Из выше изложенного можно сделать вывод, что FISH метод позво- ляет провести наиболее полный анализ кариотипа (определение на- рушений набора хромосом, диагностика транслокаций, делеций, ду- пликаций, инверсий и инсерций). Методика FISH с использованием локус-специфических ДНК-зондов ( LSI ) идеально подходит для де- текции конкретных хромосомных аберраций, имеющих диагностиче- ское и прогностическое значение. Таким образом, исследуя операционно-биопсийный материал, врач- патоморфолог становится непосредственным участником клинической диагностики заболеваний. Биопсия требует от патологоанатома клини- ческого мышления, а от врача-клинициста – умения правильно оцени- вать ответы на биопсию, а также знания и понимания пределов воз- можности этого метода. Такой клинико-анатомический подход являет- ся одним из основных принципов патологической анатомии.