000375

71 ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА Опыт 1. Изменения полостного и пристеночного пищеварения при на- рушении вегетативной регуляции В опыт берут двух крыс: здоровую и контрольную, которой за 30 ми- нут до начала эксперимента внутрибрюшинно вводят раствор пилокарпи- на гидрохлорида (избирательно возбуждает М‑холинореактивные структу- ры) из расчета 0,5 мл на 100 г массы тела. Под внутрибрюшинным гексенало- вым наркозом крыс декапитируют, срединным разрезом передней брюшной стенки вскрывают брюшную полость. Для исследования берут 50 мг верх- ней четверти тонкого кишечника и помещают в стаканчик Хагедорна с 4 мл раствора Рингера. Содержимое пробирки встряхивают в течение 30 секунд, смывая при этом ферменты, не сорбировавшиеся на щеточной кайме энтеро- цитов. Эта фракция (С‑смыв) участвует в полостном пищеварении и исполь- зуется как показатель полостного пищеварения. Далее кусочек кишки пере- носится в ступку, где производится его гомогенизация в 4 мл раствора Рин- гера. Гомогенат переносят в стаканчик Хагедорна и встряхивают в течение 5 минут, отмывая при этом ферменты пристеночного пищеварения (фракция Г‑гомогенат). Фракции С и Г фильтруют, в фильтратах проводят определе- ние амилолитической активности по методу Вольгемута. Принцип основан на определении убыли крахмала при ферментативном гидролизе по измене- нию окраски йод-крахмальных комплексов. В семь пронумерованных про- бирок наливают по 1 мл раствора Рингера. В первую пробирку приливают 1 мл исследуемой пробы и встряхивают, затем последовательно переносят по 1 мл в следующие пробирки (встряхивают), то есть готовят ряд последо- вательных разведений. Из шестой пробирки 1 мл исследуемой пробы выли- вают, в седьмую пробирку (контрольную) смесь не наливают. Во все пробир- ки приливают по 1 мл раствора крахмала и пробы инкубируют в термоста- те при температуре 38 º C в течение 30 минут. Через 30 минут ферментатив- ный процесс останавливается добавлением 1 мл 1 Н раствора соляной кис- лоты, после чего в каждую пробирку прибавляют по одной капле раствора Люголя. Амилолитическая активность рассчитывается по разведению фер- мента в последней пробирке, которая еще отличается по окраске от контро- ля. Результат выражается в условных единицах Вольгемута, характеризую- щих степень разведения. Например: 1‑я пробирка – 2 ЕД, 2‑я – 4 ЕД, 3‑я – 8 ЕД и т. д. Пользуются также коэффициентом Г/С. В физиологических условиях удельный вес мембранного пищеварения в несколько раз превышает полост- ное, и коэффициент Г/С колеблется в пределах 2,2–3,0. Результаты исследо- ваний заносят в протокол опыта.