441

11 Учитывая ограниченную проникающую способность световых лу- чей, необходимо, чтобы изучаемый объект был оптически прозрачным. Для изготовления тонких (толщиной несколько микрометров) срезов различных тканей разработана специальная гистологическая техника. Сначала объектфиксируют. Для этого небольшие кусочки тканей по- мещают в фиксатор (формалин, спирт, раствор солей ртути и др.), это вызывает консервацию структур объекта. В фиксаторе ткани можно хранить длительное время. Для дальнейшей работы фиксатор отмывают водой. После этого объект помещают в спирты возрастающей концентрации (60° → 70° → 80° → 96° → 100° (абсолютный спирт)) – спирты извлекают из объекта воду. Затем материал переносят в хлороформ. Пропитанные хлороформом ткани помещают в рас- топленный парафин. Остужая парафин, получают твёрдые парафиновые блоки с заключёнными в них объектами. Теперь ткань можно порезать на тонкие срезы с помощью специального прибора – микротома . Существуют также методы заливки тканей в желатин, пластмассы и эпоксидные смолы . Большинство биологических объектов бесцветны или слабоокра- шены, поэтому для световой микроскопии применяются разнообраз- ные красители. Например, для окрашивания ядер используют гема- токсилин. Эозин окрашивает цитоплазму клетки. Часто используется метиленовый синий – он окрашивает и ядро, и цитоплазму. Важным достоинством метиленового синего является то, что в небольших кон- центрациях (достаточных для окрашивания) он не влияет на жизне- деятельность клетки. Подобные красители называют витальными и применяют для изучения живых клеток 1 . Если необходимо, чтобы микропрепарат хранился долго без измене- ний структуры и особенностей окраски, применяют специальные ме- тоды обработки. Срезы переносят на предметные стёкла. Затем из среза удаляют парафин (он мешает окраске). Для этого стекло со срезами помеща- ют в ксилол, а затем в спирт → воду → раствор красителя. После этого окрашенные срезы снова обезвоживают в спиртах, помеща- ют в ксилол, а затем заключают в кедровый бальзам, на который накла- дывают покровное стекло. После высыхания бальзама препарат может храниться долгие годы. Такие микропрепараты называют постоянными в отличие от временных , которые изготавливают значительно проще 2 . 1 При работе с препаратами обратите внимание на использованные красители. Постарайтесь запомнить характер окраски при их применении. 2 На занятиях вы освоите методику изготовления временных микропрепаратов.