441

13 со вторым. При прохождении луча сквозь объект происходит фазовый сдвиг, величина которого пропорциональна плотности структур. С помо- щью этого метода также можно изучать живые клетки, но, в отличие от тёмнопольной микроскопии, изображение получается цветным. Широко применяются методы флуоресцентной микроскопии . Они основаны на способности ряда красителей (флуорохромов) поглощать свет одной длины волны и излучать свет другой (большей) длины волны. Некоторые вещества обладают собственной флуоресценцией. Напри- мер, витамины А, B 2 , некоторые липиды, хлорофилл и др. при облучении ультрафиолетом дают характерное свечение определённой окраски. Наиболее часто употребляемые флуорохромы – акридин оранжевый, флуоресцин, йоди- стый пропидий. Флуоресцентный микроскоп отличается от обычного специальным осветителем и системой фильтров, позволяющих получить изображе- ние светящейся структуры на тёмном поле. Развитие электронной техники позволило оснастить микроскопы цифровыми фото- и видеокамерами и передавать изображение в ком- пьютер. Разработано множество программ для анализа изображений биологи- ческих структур. Они позволяют определить количество, линейные размеры объектов, степень их окрашивания – это избавляет исследователя от дол- гой рутинной работы. Микроскопы, объединённые с компьютерными систе- мами и программами анализа изображений, получили название цифровых . 2.2. КОНФОКАЛЬНАЯ МИКРОСКОПИЯ Один из самых современных и перспективных методов изучения клетки. Конфокальный микроскоп (КМ) принципиально сходен со све- товым 1 . Теоретически его разрешающая способность всего в 1,4 раза выше таковой для светового микроскопа, однако в конструкции КМ использован ряд принципиальных усовершенствований. КМ – прибор оптико-электронный. Это сложная система, в состав которой входит компьютер со специальным программным обеспече- нием, осветитель особой конструкции и фотоприёмник. Следователь- но, его разрешающая способность и другие свойства зависят не только от оптических узлов, но и от электронных систем преобразования опти- ческого сигнала в аналоговый электрический, а затем и в цифровой. 1 Принцип конфокальной микроскопии был разработан в 1977 г., а в 1979 г. созданы первые установки.