446

6 Таблица 1. Методы фракционирования и очистки белков Название метода Принцип метода Применение 1. Высаливание Осаждение белков из раствора (пу- тем снятия заряда и гидратной обо- лочки) при добавлении солей ще- лочных и щелочноземельных ме- таллов и сульфата аммония. Раз- личные белки выпадают при раз- ной концентрации соли в растворе. Для фракционирования бел- ков. Например, для разделе- ния глобулинов (выпадают в осадок при 50% насыще- нии) и альбуминов (при 100% насыщении). 2. Диализ Белки не способны проходить че- рез полупроницаемую мембрану, легко пропускающую низкомоле- кулярные вещества. Для очистки белков от низко- молекулярных примесей (со- лей); используется в аппарате искусственной почки. 3. Хроматография Метод основан на способности ве- ществ (окрашенных или неокра- шенных) специфически адсорби- роваться на адсорбенте, заключен- ном в колонку Для разделения белков на фракции 3.1. адсобционная метод основан на разной сорби- руемости на твердом адсорбенте 3.2.распредели- тельная Распределение веществ между неподвижной и движущейся фа- зой органического растворителя. Разделяемые вещества переме- щаются с разной скоростью Хроматография на бумаге для разделения аминокислот, пептидов. 3.3. ионообменная Связывание ионизированных групп белкой молекулы с противополож- но заряженными группами ионооб- менных нерастворимых полимеров. Для фракционирования бел- ков. 3.4. аффинная (по сродству) Связывание белка специфичным лигандом, который присоединен к нерастворимому полимеру. Ли- гандами могут быть субстраты, коферменты, антигены, рецепто- ры, гормоны и др. Для выделения индивидуаль- ных белков. 3.5. гель- фильтрация Метод «просеивания» молекул че- рез гранулы сефадекса, имеющего поры. Скорость прохождения за- висит от молекулярной массы бел- ков: чем меньше масса молекул, тем легче они проникают внутрь гранул и дольше там задержива- ются; чем больше масса молекул, тем быстрее они выделяются. Для разделения белков по мо- лекулярной массе.