478

15 Работа 4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ОБЩЕГО ХОЛЕСТЕРОЛА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ Холестерол – спирт стероидной природы, который нахо‑ дится во всех тканях человеческого организма. В крови со‑ держится 7–10% от общего количества холестерола в ор‑ ганизме (составляющего у взрослого человека 140–150 г). По крови холестерин транспортируется только в составе ли‑ попротеинов. Общий холестерол сыворотки крови представ‑ лен двумя фракциями: свободным холестеролом и эфирнос‑ вязанным (холестерол за счет своей гидроксильной группы может образовывать эфиры с жирными кислотами). В сыво‑ ротке крови содержание этерифицированного холестерола составляет 70%, а свободного – 30% от общего. Принцип метода. Определение концентрации общего холестерина основано на проведении сопряженных реакций, катализируемых холестеролэстеразой, холестеролоксидазой и пероксидазой: • при гидролизе эфиров холестерина под действием холе- стеролэстеразы образуется свободный холестерин • образовавшийся и имеющийся в пробе свободный холе‑ стерин окисляется кислородом воздуха при участии фермен‑ та холестеролоксидазы с образованием эквимолярного ко‑ личества перекиси водорода • под действием пероксидазы перекись водорода окис‑ ляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски пропорциональна концен‑ трации холестерина в исследуемой сыворотке крови. Реактивы и материалы Оборудование 1. Сыворотка крови 1. Штатив с пробирками 2. Рабочий раствор ферментов, содержащий холестеролэстеразу, холестеролоксидазу, пероксидазу 2. Пипетки 3. Термостат 3. Стандартный раствор холестерола 4. Фотоэлектроколориметр (ФЭК)