478

18 3. Стандартный раствор, содержащий холестерол в концентрации 1,29 ммоль/л (50 мг/100 мл) 3. Фотоэлектроколориметр (ФЭК) 4. Рабочий раствор ферментов, содержащий холестеролэстеразу, холестеролоксидазу, пероксидазу Ход работы 1. В три пробирки штатива № 1 наливают по 0,3 мл осаж‑ дающего реагента. 2. В опытную пробирку добавляют 0,15 мл сыворотки кро‑ ви, в контрольную – 0,15 мл дистиллированной воды, в кали‑ бровочную– 0,15 мл стандартного раствора холестерола, пере‑ мешивают, инкубируют 10 минут при температуре 18–25 °C. 3. Опытную пробу центрифугируют 10 минут при 3000 об/мин. 4. В три пробирки штатива № 2 наливают по 2 мл рабо‑ чего раствора ферментов для определения концентрации хо‑ лестерола. 5. В опытную пробирку № 2 переносят 0,2 мл исследу‑ емой жидкости из опытной пробирки № 1. Также проводят перенос 0,2 мл жидкости в контрольную пробирку № 2 и ка‑ либровочную № 2 соответственно из контрольной № 1 и ка‑ либровочной № 1. 6. Пробы инкубируют 10 минут при температуре 18–25 °C. 7. Измеряют оптическую плотность растворов на фотоэ‑ лектроколориметре при длине волны 490 нм (зеленый свето‑ фильтр) в кювете с длиной оптического пути 1,0 см. Фотоме‑ трируют против контрольной пробы. Расчет концентрации холестерола в составе α–липопроте‑ инов сыворотки крови: α-ЛП (ммоль/л) = ОП оп /ОП калиб × 1,29  или α-ЛП (мг/100 мл) = ОП оп /ОП калиб × 50 где ОП оп  – оптическая плотность опытной пробы; ОП калиб  – опти- ческая плотность калибровочной пробы; 1,29 ммоль/л (50 мг /100 мл) – концентрация холестерина в калибраторе