503

4 2. Решите ситуационную задачу: В иммунологическую лабораторию медицинского учреждения об- ратился мужчина с целью установить, является ли он отцом ребенка. У отца, матери, ребенка была взята венозная кровь для иммунофено- типирования лимфоцитов по системе HLA с помощью микролимфо- цитотоксического теста. Принцип и проведение микролимфоцитотоксического теста: Перед исследованием: • получают суспензию лимфоцитов путем центрифугирования в градиенте плотности и 2–3‑кратной отмывкой супернатанта в физио- логическом растворе; • размораживают микропланшет, содержащий в каждой лунке по 1 мкл антилейкоцитарных гистотипирующих поликлональных сы- вороток (анти- HLA - A , анти- HLA - B , анти- HLA - C ) в соответствии с про- токолом исследования. 1. В каждую лунку добавляют 1 мкл суспензии лимфоцитов (2000–3000 клеток/мкл). 2. Инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин. для связывания антител с антигенами системы HLA на мембране клеток. 3. Добавляют 5 мкл кроличьего комплемента, затем инкубируют при комнатной температуре 60 мин. Комплемент повреждает мембра- ны тех лимфоцитов, на поверхности которых образовались иммунные комплексы. 4. Для того, чтобы различить поврежденные и неповрежденные лимфоциты, их окрашивают, добавляя 3 мкл 5% эозина с последую- щей (через 5 мин.) фиксацией 37% формальдегидом (5 мкл). Учет реакции производят через 30 мин.: Таблица 1. Оценка результатов микролимфоцитотоксического теста  % погибших клеток Результат 0–10 (-) Отрицательный 11–20 (+) Сомнительный отрицательный 21–50 (++) Слабоположительный 51–80 (+++) Положительный 81–100 (++++) Сильноположительный Полученные результаты: Отец: А2,26 В18,27 С w 3,4 Мать: А2,11 В18,44 С w 3,4 F 1 : А2,3 В18,51 С w 3,4