506

17 и антигеннеспецифическая активация Т‑лимфоцитов (например, под действием митогенов: фитогемагглютинина, конкавалина А, антител к  CD 3) и В‑лимфоцитов (например, под действием антител к  Fab  – фрагентам  IgM , Staphylococcus aureus штамм Cowan C ). Активация Т‑ и В‑лимфоцитов после воздействия антигенспецифи- ческих и антигеннеспецифических активаторов может оценивать- ся по заметному повышению концентрации кальция в их цитоплаз- ме в течение нескольких секунд, по гиперэкспрессии антигенов CD69, CD71 на поверхности лимфоцита в течение нескольких часов, по повы- шению уровня экспрессии CD23, CD25 на клетках в течение 2–3 дней. • Способность к пролиферации T ‑, B ‑лимфоцитов под действием тех же антигенспецифических и антигеннеспецифических активаторов. 1. Исторически первый метод – микроскопический (морфологиче- ский). Клетки, прошедшие S‑фазу, но еще не прошедшие митоз, име- ют двойное количество ДНК и остальных компонентов хромосом. Со- ответственно вся клетка больше по размеру, чем неделящиеся клет- ки, что хорошо видно на препаратах мазков или даже в живой куль- туре под световым микроскопом. Микроскопический метод детекции клеток в S‑фазе называют «реакцией бласттрансформации» и в на- стоящее время используют по крайней мере для демонстрации бласт- ных и других форм лимфоцитов. Помимо поликлональной активации Т‑ и В‑лимфоцитов митогенами, достаточно широко используются методы, основанные на стимуляции антиген/аллерген-специфических клонов Т‑ и В‑клеток. Естественно, что в последнем случае число трансформированных клеток может быть мало. Для их подсчета морфологический метод непригоден. 2. Колориметрический метод основан на использовании вну- триклеточных прижизненных красителей, включаемых в цепи ДНК. Это, например, MTT – 3- (4,5‑диметилтиазол‑2‑ил)-2,5‑дифе- нилтетразолиум бромид. 3. Микроцитофлюориметрический метод основан на использовании флюоресцентных красителей, включаемых в цепи ДНК, с последующей оценкой уровня флюоресценции на проточном цитофлюориметре. 4. Радиоизотопный метод основан на использовании меченых ну- клеотидов, включаемых в состав только ДНК, в частности ти- мидина (  3 H-Td) – β-излучатель, тимидина  14 C-Td – γ-излучатель или  131 I-дезокситимидина – γ-излучатель с последующей оценкой ради- оактивного излучения с помощью счетчика.