506

18 • Способность к синтезу и секреции цитокинов T ‑лимфоцитами или иммуноглобулинов B ‑лимфоцитами. Метод клеточных пятен (ELISPOT, Enzyme-Linked Immunospot) с γ-интерфероном для определения числа антигенспецифичных Т‑клеток в культуре клеток: для определения степени специфичности антигена измеряют количество цитокина, образовавшегося в результате сти- муляции Т‑клеток антигеном. В лунку планшета, покрытую антите- лами против данного цитокина (например, γ-интерферона) помеща- ют антиген, антгенпрезентирующие клетки и Т‑лимфоциты, а затем инкубируют 24–48 ч. Клетки, стимулированные антигеном, образуют γ-интерферон, который связывается с иммобилизованными на дне лунки антителами. После инкубации клетки вымывают, а в планшет добавля- ют биотинилированные вторичные антитела против γ-интерферона. На следующем этапе добавляют стрептавидин, который связывает- ся с биотином. Фермент, находящийся в конъюгате со стрептавиди- ном, активирует хромогенный субстрат, который окрашиваетту зону, в которой стимулированные Т‑лимфоциты производили γ-интерферон. Число таких зон указывает на число цитокин-образующих клеток. Метод клеточных пятен (ELISPOT, Enzyme-Linked Immunospot) для определения числа антигенспецифичных В‑клеток в культуре клеток: В‑клетки помещают в чашки, покрытые подходящим антигеном. Специфические антитела, образуемые и секретируемые В‑клетками, связываются с антигеном. Свободные антитела и клетки отмыва- ют. Затем добавляют связанные с ферментом антитела протии им- муноглобулинов, а затем покрывают поверхность чашек гелем, со- держащим хромоген. Цветная реакция имеет место там, где прои- зошло связывание специфических антител. В результате образуют- ся цветные пятна, число которых соответствует числу клеток, се- кретирующих антитела. • Цитотоксичность NK -лимфоцитов. Функциональная активность (цитотоксичность) NK оценивает- ся по способности убивать клетки-мишени (например, клетки эри- тромиелоидной линии К562 человека, меченные радиоактивными изо- топами Cr  51 или Н  3 ‑уридином). Клетки-мишени метят изотопом Н  3 ‑уридином и инкубируют при определенных условиях. Затем клетки трижды отмывают культуральной средой с целью удаления Н  3 ‑ури- дина, не включившегося в РНК клеток-мишеней. Затем смешивают