506

26 поликарбонатной) мембраной с порами фиксированного размера. Для исследования хемотаксиса применяют мембраны с диаметром пор 3, 5 или 8 мкм. Размер пор выбирают в зависимости от размера изуча- емых клеток. Поры должны быть достаточно малы, чтобы не допу- скать пассивного «проваливания» клеток под действием силы тяже- сти, но достаточно велики, чтобы пропустить через себя мигриру- ющую клетку с учетом возможностей ее пластичности. Клеточные суспензии помещают в верхние камеры, а растворы хемоаттрактан- тов – в нижние. Хемотаксический градиент создается между верх- ней и нижней поверхностью мембраны. В ходе инкубации клетки под действием градиента хемоаттрактантов мигрируют через поры мембран. По окончании инкубации количественно оценивают мигра- цию клеток. Применяют различные варианты оценки. Слабо прилипа- ющие клетки (например, лимфоциты), пройдя через поры мембраны, свободно опускаются на дно лунки. Их собирают и подсчитывают либо в гемоцитометре, либо на проточном цитометре. Прилипающие клетки, пройдя через поры, остаются прикрепленными к нижней по- верхности мембраны. Здесь возможны два варианта оценки: 1) клет- ки отделяют от нижней поверхности мембраны путем трипсини- зации или обработки ЭДТА и подсчитывают в суспензии, как указа- но выше; клетки фиксируют непосредственно на нижней поверхно- сти мембраны и окрашивают любым приемлемым способом (напри- мер, по Романовскому-Гимза), после чего подсчитывают мигрировав- шие клетки под микроскопом. 2) Оценка адгезивных свойств лейкоцитов. За адгезивные свойства нейтрофилов и моноцитов отвечают их поверхностные рецепторы, называемые селектинами ( CD 62) и интегринами ( CD 11 a /18, CD 11 b /18, CD 11 c /18), идентификация которых возможна с помощью монокло- нальных антител методом проточной цитофлюориметрии или в ре- акции непрямой иммунофлюоресценции. Для определения функцио- нальной активности адгезивных молекул фагоцитов применяют их способность прикрепляться к пластику, стеклу, культуре эпители- альных клеток. Спектрофотометрический метод определения спо- собности фагоцитирующих клеток прикрепляться к пластику заклю- чается в окрашивании по Романовскому-Гимзе монослоя прилипаю- щих клеток в лунках 96‑луночного планшета, последующей экстрак- ции краски и определении оптической плотности этой краски.