506

27 3) Оценка поглощения объекта фагоцитоза (фагоцитарного показа‑ теля, фагоцитарного числа, фагоцитарного индекса) по  способности фагоцитов поглощать частицы латекса или зимозана, дрожжевые или бактериальные клетки, эритроциты с окраской по Романовскому- Гимзе. Также можно использовать радиометрический метод с погло- щением микроорганизмов, меченных тритиевым тимидином. Исполь- зование флюоресцентного микроскопа облегчает оценку процента фагоцитировавших лейкоцитов благодаря четкому мечению объектов фагоцитоза, имеющих особенно малые размеры (вирусы, риккетсии, микобактерии, хламидии). Наиболее объективным на сегодня являет- ся метод проточной цитофлюориметрии, при котором применяют специальные флюоресцентные красители (ФИТЦ, люциферин и др.). 4) Оценка полноценности переваривающей функции фагоцита по сте‑ пени завершенности фагоцитоза (с. 24). Наиболее надежный метод оцен- ки завершенности фагоцитоза – микробиологический, заключающий- ся в выращивании на питательных средах и измерении числа бактерий, выживших в лейкоцитах после фагоцитоза. При применении проточной цитофлюориметрии используют флюоресцентные красители, диффе- ренцированно окрашивающие живые и убитые микробные клетки. 5) Оценка образования активных форм кислорода может прово- диться разными методами: НСТ-тест, проточная цитофлюориме- трия, хемилюминесценция. Принцип с понтанного (базового) теста с нитросиним тетразолием (НСТ-тест базовый) заключается в поглощении из среды фагоцитиру‑ ющими клетками бесцветного нитросинего тетразолия (НСТ) и вос‑ становлении его в темно-синий диформазан. Активированный (сти- мулированный) тест с нитросиним тетразолием (НСТ стимулирован‑ ный) заключается в поглощении из среды и восстановлении нитроси‑ него тетразолия при добавлении в суспензию гранулоцитов объекта фагоцитоза. Активность восстановления НСТ отражает состояние бактерицид‑ ных пероксидазных систем клетки и коррелирует с образованием супе‑ роксидных радикалов. Для постановки НСТ-теста к 0,1 мл лейковзвеси добавляют 0,1 мл 0,2% нитросинего тетразолия. Смесь инкубируют в водяной бане при температуре 37 °C в течение 25 мин и при комнат- ной температуре в течение 15 мин. Далее клетки трижды отмывают средой 199 и готовят препараты. Высушенные препараты фиксируют