000667

18 7.На хроматограмме проявляются ярко окрашенные пятна амино- кислот. При этом гидрофильные аминокислоты будут находится ближе к месту старта, а гидрофобные – ближе к фронту движения раство- рителя. 8.Измеряют расстояние от центра нанесения аминокислот (старта) до центра первого пятна (а), второго пятна (b), расстояние до фронта растворителя (с). 9. Рассчитывают коэффициенты распределения аминокислот (см. рисунок). Распределительная хроматография аминокислот применяется для анализа аминокислотного состава гидролизатов белков (по коэффици- енту распределения аминокислот) и количества аминокислот (по вели- чине пятна и интенсивности окраски). Рекомендации к составлению протокола: Нарисовать рисунок, провести измерения и расчеты коэффициен- тов распределения для глутаминовой кислоты и лейцина. Работа 5. РАЗДЕЛЕНИЕ АЛЬБУМИНОВ И ГЛОБУЛИНОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ Метод высаливания используют для выделения и фракциониро- вания индивидуальных белков, используя их способность осаждаться различными концентрациями одних и тех же солей. Степень выпаде- ния белков в осадок зависит от концентрации соли, размера и массы белковой молекулы и величины ее заряда. При малой концентрации со- лей осаждаются наиболее крупные, тяжелые и обладающие наимень- шим зарядом белки, при более высокой концентрации солей выпадают в осадок мелкие и устойчивые белковые частицы. Для разделения белков методом высаливания используют различ- ные концентрации сернокислого аммония. При 50% насыщении рас- твора сернокислым аммонием выпадают в осадок глобулины, а при полном насыщении (100%) ‒ альбумины.