000667

23 4. Охлаждают гидролизат и затем отфильтровывают его. 5. Фильтрат нейтрализуют 6Н раствором едкого натра до слабо розовой окраски по фенолфталеину. На занятиях рекомендуется иметь заранее приготовленные гидро- лизаты кожи. 9.2. Определение гидроксипролина в гидролизате кожи Гидроксипролин образуется в результате окисления остатков про- лина в составе α-цепи препроколлагена на этапе пострибосомальной модификации в процессе микросомального окисления под действием фермента пролилгидроксилазы. Метод основан на окислении гидроксипролина хлорамином В, про- дукты окисления конденсируют парадиметиламинобензальдегидом, при этом образуется хромаген красного цвета. Реактивы и материалы Оборудование 1. Нейтрализованный гидролизат кожи 1. Штатив с пробирками 2. Хлорамин (7% раствор) 2. Пипетки 3. Реактив Эрлиха 4 г пара-диметила- минобензальдегида, 380 мл этилового спирта 96˚, 80 мл концентрированной соляной кислоты) 3. Водяная баня (100˚С) Ход работы: 1. К 0,5 мл нейтрализованного гидролизата добавляют 0,5 мл 7% раствора хлорамина и встряхивают. 2. Через 4-5 минут к смеси добавляют 0,5 мл реактива Эрлиха. 3. Пробирку помещают в кипящую водяную баню на 70-80 сек. Появление розового окрашивания свидетельствует о наличии в сме- си гидроксипролина. Интенсивность окраски зависит от концентрации гидроксипролина в смеси.